TÉCNICAS DE PCR (reacción en cadena de la polimerasa) PARA LA DETECCIÓN DEL VPH

 TEMA: Detección del Virus del Papiloma Humano en biopsias mediante un test de PCR en tiempo real. 

OBJETIVO: Determinar la distribución del subtipo del VPH entre personas que viven con VIH con lesiones intraepiteliales escamosas anales de alto grado.

MUESTRA: Biopsia anal.

TIPO DE ÁCIDO NUCLEICO: ADN viral. 

EXTRACCIÓN: La extracción se realizó con el estuche comercial QIAa Mini Kit.

GENES A ANALIZAR: B-actina humana, VPH-31, VPH-18, VPH-45 en el epitelio anal.

TAMAÑO EN PARES DE BASES:  B-actina humana (250 pb), VPH-31 (128 pb), VPH-18 (357 pb), VPH-45 (309 pb).

TIPO DE PCR: PCR en tiempo real (TR) (cualitativa), < 40 ciclos.

PASOS:

1. DESNATURALIZACIÓN: Durante 60 seg. a 90º.

2. HIBRIDACIÓN: Durante 60 seg. a 55º.

3. ELONGACIÓN: Durante 60 seg. a 72º.

4. ELECTROFORESIS:

REFERENCIAS:

1.

Liu Y, Sigel KM, Westra W, Gitman MR, Zheng W, Gaisa MM. HIV-Infected Patients With Anal Cancer Precursors: Clinicopathological Characteristics and Human Papillomavirus Subtype Distribution. Diseases of the Colon & Rectum. 2020 Jul;63(7):890–6. Disponible en: 

https://journals.lww.com/dcrjournal/abstract/2020/07000/hiv_infected_patients_with_anal_cancer_precursors_.8.aspx